液相色譜柱是液相色譜儀（HPLC、UHPLC等）的核心部件，用于實(shí)現(xiàn)樣品中各組分的分離。它通常是一個(gè)裝填有固定相的圓柱形壓力容器，由不銹鋼、鈦合金或其他耐壓、耐腐蝕材料制成，內(nèi)部填充有特定性質(zhì)的顆粒狀填料，如硅膠基質(zhì)鍵合相、聚合物基質(zhì)填料等。

　　液相色譜柱的分離基于樣品中各組分在固定相和流動(dòng)相（液體溶劑）之間分配行為的差異。當(dāng)流動(dòng)相攜帶樣品通過色譜柱時(shí)，不同組分因與固定相的相互作用力（如吸附、分配、離子交換、尺寸排阻等）不同，在色譜柱中的遷移速度產(chǎn)生差異，從而實(shí)現(xiàn)分離。與固定相作用強(qiáng)的組分遷移慢、保留時(shí)間長(zhǎng)；作用弱的組分遷移快、保留時(shí)間短。最終，不同組分按順序從色譜柱出口流出，被檢測(cè)器檢測(cè)并記錄，形成色譜峰。

　　液相色譜柱的操作步驟：

　　1、使用前的檢查和須知事項(xiàng)

　　檢查色譜柱的狀態(tài)：在使用之前，檢查色譜柱是否有物理損傷或泄漏。

　　確認(rèn)色譜柱的信息：了解色譜柱的型號(hào)、粒徑、內(nèi)徑、長(zhǎng)度以及適用的pH范圍和溫度限制。

　　查閱說明書：根據(jù)廠家提供的說明書來確定正確的操作方法和注意事項(xiàng)。

　　2、色譜柱的安裝

　　連接色譜柱：按照流動(dòng)方向（通常標(biāo)記為箭頭）正確地將色譜柱連接到系統(tǒng)中。確保接頭與柱頭深度匹配，避免產(chǎn)生死體積或漏液。

　　過渡溶劑：如果新柱保存溶劑與即將使用的流動(dòng)相不兼容，則需要先用適當(dāng)?shù)倪^渡溶劑沖洗色譜柱，以防止固定相溶解或沉淀。

　　3、系統(tǒng)的沖洗和平衡

　　沖洗管路：在連接色譜柱之前，應(yīng)首先沖洗整個(gè)流路系統(tǒng)，去除可能存在的氣泡或其他污染物。

　　平衡色譜柱：將色譜柱連接好后，需要用目標(biāo)流動(dòng)相或相似的溶劑對(duì)色譜柱進(jìn)行沖洗，直到基線平穩(wěn)為止。這一步驟有助于排除色譜柱中的空氣，并確保色譜柱內(nèi)部充滿合適的溶劑。

　　4、樣品的準(zhǔn)備

　　樣品過濾：所有待分析的樣品都需要經(jīng)過0.22μm或更細(xì)孔徑的濾膜過濾，以去除顆粒物質(zhì)，避免堵塞色譜柱。

　　稀釋樣品：必要時(shí)對(duì)樣品進(jìn)行適當(dāng)稀釋，以適應(yīng)檢測(cè)器的靈敏度要求。

　　5、進(jìn)樣分析

　　進(jìn)樣量：選擇合適的進(jìn)樣量，通常不超過色譜柱容量的10%。

　　進(jìn)樣方式：可以采用手動(dòng)進(jìn)樣或自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣，具體取決于儀器配置和個(gè)人偏好。

　　6、數(shù)據(jù)采集與解析

　　設(shè)定參數(shù)：設(shè)置工作站上的參數(shù)，如流速、柱溫、檢測(cè)波長(zhǎng)和流動(dòng)相比例等。

　　實(shí)時(shí)監(jiān)控：?jiǎn)?dòng)液相色譜儀，開始數(shù)據(jù)采集，并實(shí)時(shí)監(jiān)控壓力曲線和基線信號(hào)是否正常。

　　7、關(guān)機(jī)與維護(hù)

　　清洗色譜柱：分析結(jié)束后，需用高比例水相流動(dòng)相沖洗色譜柱，隨后再用有機(jī)相徹d清洗，以防鹽分殘留導(dǎo)致色譜柱損壞。

　　保存色譜柱：長(zhǎng)期不用時(shí)，應(yīng)將色譜柱保存在推薦的溶劑中，并密封兩端，防止污染。

　　填寫記錄：完成實(shí)驗(yàn)后，記得填寫儀器使用記錄，清理工作臺(tái)面并處理廢液。